RBR-8hfqsm Screening of patients with hypercholesterolemia caused by family origin: development of a method for identifying…

Date of registration: 12/07/2016 ^(mm/dd/yyyy)
Last approval date : 12/07/2016 ^(mm/dd/yyyy)

Study type:

Observational

Scientific title:

Trial identification

• UTN code: U1111-1187-7593

• Public title:

  en

  Screening of patients with hypercholesterolemia caused by family origin: development of a method for identifying genetic mutations that cause the disease and association between genetic and clinical characteristics of patients

  pt-br

  Rastreamento de pacientes com hipercolesterolemia de origem familiar: desenvolvimento de um método para identificação de mutações genéticas que causam a doença e associação entre as características genéticas e clínicas dos pacientes

• Scientific acronym:

• Public acronym:
• Secondaries identifiers:
  • CAAE-54585416.1.0000.0121
    Issuing authority: Plataforma Brasil
  • CEP-1.694.087
    Issuing authority: Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos da Universidade Federal de Santa Catarina

Sponsors

• Primary sponsor: Edson Luiz da Silva
• Secondary sponsor:
  • Institution: Universidade Federal de Santa Catarina
• Supporting source:
  • Institution: Universidade Federal de Santa Catarina

Health conditions

• Health conditions:

  en

  hyperlipoproteinemia type II, diseases of the circulatory system, atherosclerosis, cholesterol of low density lipoprotein (LDL-c)

  pt-br

  Hiperlipoproteinemia tipo II, doenças do aparelho circulatórios, aterosclerose, colesterol da lipoproteina de baixa densidade (LDL-c)

• General descriptors for health conditions:

  en

  I00-I99 IX - Diseases of the circulatory system

  pt-br

  I00-I99 IX - Doenças do aparelho circulatório

• Specific descriptors:

Interventions

• Interventions:

  en

  Observacioanl study. We will standardized a method for identifying mutations causing familial hypercholesterolaemia and, from this method, we will identified patients with Familial Hypercholesterolemia in different regions of Brazil, defining cardiovascular risk and association of genotype with phenotype found in patients. The genotyping method is based on the amplification of deoxyribonucleic acid, using the polymerase chain reaction and sequencing of the amplified product by Sanger sequencing using sequencer Hitachi 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems® AB, Foster City/USA) and using the BigDye® Terminator Kit (AB Applied Biosystems®, Foster City/USA). The assembly of contigs and analyis of quality will be made through the package Phred/Phrap/Consed (http: //www.phrap. org). Confirmation of fragments identit will be carried out using the BLAST algorithm (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Amplification will occur using specific primers for each exon of the low density lipoprotein receptor. The primers will be designed using the BLAST algorithm (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST), Bioedit sotfware (bioedit.software.informer.com) and Primer Select (DNASTAR Lasergene v6). The collection of samples (whole blood, serum) will be performed after 12 hours of fasting using vacuum system for blood collection (10 milliliters). Eventually, bucal swabs can be used to genotyping. The project will occur in the cities of Papanduva (Santa Catarina) and Bom Despacho (Minas Gerais), where we obtained support from the Municipal Health Department and the professionals responsible for sample collection. Based on personal information (obtained by questionnaires), laboratory parameters (biochemical analysis), treatment history (obtained by questionnaires) and genotyping, the identification of index cases with familial hypercholesterolaemia will be made. After sequencing of the genes that cause familial hypercholesterolaemia and from the mutations found, screening will be done on first, second and third degrees of index cases. It will be carried out assessment of risk markers for cardiovascular disease, such as total cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol, triglycerides, glucose, small and dense fraction of low-density lipoprotein, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, urea, creatinine, C-reactive protein with high sensitivity, ApolipoproteínaB, lipoprotein (a), by laboratory methods. All laboratory tests will be carried out in the Research Laboratory of Lipids, Antioxidants and Atherosclerosis of the Department of Clinical Analysis at UFSC and Clinical Laboratory of University Hospital, Federal University of Santa Catarina, Florianópolis. The sets of reagents will be obtained from the company Siemens Healthcare Diagnostics Inc- United States, and performed in automated equipment Dimension (Siemans Healthcare Diagnostics Products GMBH - Germany). The small dense fraction of low density lipoproterína will be determined after the selective precipitation of other lipoproteins with heparin and chloride magnésio. Quantification of C-reactive protein of high sensitivity will be held in the automated device nephelometer Behring BN II (Siemans Healthcare Diagnostics Products GMBH - Germany) with set of reagents Siemens Healthcare Diagnostics Inc - USA). Anthropometric measurements and blood pressure measurement will also be performed. Will be measured weight (kg) and height (meters), with equipment (Welmy, São Paulo-SP), consisting of scale with a capacity of 200 kilograms and 100 grams of scale and stadiometer with capacity up to 2.0 meters and scale 0.5 cm. Body mass index (BMI) will be estimated according to [weight/height squared] equation. The measurement of waist circumference will be held with inelastic tape, with 0.1 cm scale, with the individual in orthostatic position at the end of expiration, at the midpoint between the last rib and the iliac crest. the blood pressure measurement is performed with sphygmomanometer and cuff, after 5 minutes of rest, and preferably in the right arm.

  pt-br

  Estudo observacioanl. Será padronizado um método para a identificação de mutações causadoras de Hipercolesterolemia familiar e, a partir dele, será feita a identificado de pacientes com Hipercolesterolemia Familiar em diferentes regiões do Brasil, definição do risco cardiovascular e associação do genótipo com o fenótipo encontrado nos pacientes. O método de genotipagem será baseado na amplificação do DNA (ácido desoxiribonucleico) por meio da reação em cadeia da polimerase e no sequenciamento do produto amplificado por meio do sequenciamento de Sanger utilizando o sequenciador Hitachi 3500 Genetic Analyzer (AB Applied Biosystems®, Foster City/EUA) e utilizando o Kit BigDye® Terminator (AB Applied Biosystems®, Foster City/EUA).A montagem dos contigs e a análise da qualidade serão feitas por meio do pacote Phred/Phrap/Consed (http://www.phrap.org). A confirmação da identidade dos fragmentos será realizada utilizando o algoritmo BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). A amplificação ocorrerá utilizando iniciadores específico para cada exon do gene do receptor das partículas do colesterol de baixa densidade.Os iniciadores serão desenhados utilizando o algoritmo BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST), o sotfware Bioedit (http://bioedit.software.informer.com) e o software Primer Select (DNASTAR Lasergene v6) . A coleta de amostras (sangue total, soro e swab bucal) será realizada após 12 horas de jejum utilizando sistema á vácuo para coleta de sangue (10 mililítros). O projeto ocorrerá nos municípios brasileiros de Papanduva (Santa Catarina) e Bom despacho (Minas Gerais), onde já obtivemos apoio das Secretarias Municipais de Saúde, bem como dos profissionais responsáveis pelas coletas de amostras. Com base em informações pessoais (obtidas por questionários), parâmetros laboratoriais (análise bioquímica), histórico de tratamento (obtido por questionários) e genotipagem, será feita a identificação dos casos índices com Hipercolesterolemia familiar. Após o sequenciamento dos genes causadores de Hipercolesterolemia familiar e, a partir das mutações encontradas, será feita triagem dos parentes de primeiro, segundo e terceiro graus dos casos índices. Será realizada avaliação dos marcadores de risco para doenças cardiovasculares, como colesterol total, colesterol da lipoproteína de baixa densidade, colesterol da lipoproteína de alta densidade, triglicerídeos, glicose, fração pequena e densa da lipoproteína de baixa densidade, alanina aminotransferase,aspartato aminotransferase, ureia, creatinina, proteína C reativa de alta sensibilidade, ApolipoproteínaB, lipoproteína (a), através de métodos laboratoriais. Todas as análises laboratoriais serão realizadas no Laboratório de Pesquisa em Lipídeos, Antioxidantes e Aterosclerose do Departamento de Análises Clínicas da UFSC e no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis-SC. Os conjuntos de reagentes serão obtidos da empresa Siemens Healthcare Diagnostics Inc- Estados Unidos, e realizadas no equipamento automatizado Dimension (Siemans Healthcare Diagnostics Products GMBH - Alemanha).A fração pequena e densa da lipoproterína de baixa densidade será determinada após a precipitação seletiva das demais lipoproteínas com heparina e cloreto de magnésio.A quantificação da proteína C reativa de alta sensibilidade será realizada no aparelho automatizado Nefelômetro Behring BN II (Siemans Healthcare Diagnostics Products GMBH - Alemanha), com conjunto de reagentes Siemens Healthcare Diagnostic Inc - EUA) Também serão realizadas as medidas antropométricas e a aferição da pressão arterial. Serão aferidos o peso (quilo) e a altura (metros), com equipamento (Welmy, São Paulo-SP), constituído de balança com capacidade para 200 quilos e escala de 100 gramas e estadiômetro com capacidade até 2,0 metros e escala de 0,5 centímetros. O índice de massa corporal (IMC) será estimado segundo a equação [peso/altura ao quadrado]. A medida da circunferência da cintura será realizada com fita métrica inelástica, com escala de 0,1 centímetros, estando o indivíduo na posição ortostática, ao final da expiração, no ponto médio entre o último arco costal e a crista ilíaca superior.A aferição da pressão arterial será realizada com esfigmomanômetro e manguito, após repouso de 5 minutos e, preferencialmente, no braço direito.

• Descriptors:

  en

  E01.370.225.124.100 Blood Chemical Analysis

  pt-br

  E01.370.225.124.100 Análise Química do Sangue

  es

  E01.370.225.124.100 Análisis Químico de la Sangre

  en

  E01.370.600.024 Anthropometry

  pt-br

  E01.370.600.024 Antropometria

  es

  E01.370.600.024 Antropometría

  en

  E05.393.442 Genotyping Techniques

  pt-br

  E05.393.442 Técnicas de Genotipagem

  es

  E05.393.442 Técnicas de Genotipaje

Recruitment

• Study status: Recruiting
• Countries
  • Brazil
• Date first enrollment: 02/23/2016 ^(mm/dd/yyyy)
• Date last enrollment: 12/06/2016 ^(mm/dd/yyyy)

• Target sample size:	Gender:	Minimum age:	Maximum age:
  200	-	1 D	100 Y

• Inclusion criteria:

  en

  Individuals with concentration of low density lipoprotein cholesterol above 160 mg / dL, and their relatives first, second and third degrees. Both genders.

  pt-br

  Indivíduos com concentração do colesterol da lipoproteína de baixa densidade acima de 160 mg/dL, e seus parentes de primeiro, segundo e terceiro graus. Ambos os gêneros.

• Exclusion criteria:

  en

  Not include exclusion criteria.

  pt-br

  Não constam critérios de exclusão.

Study type

• Study design:

• Expanded access program	Purpose	Intervention assignment	Number of arms	Masking type	Allocation	Study phase
  	Diagnostic	Single-group	0	Open	N/A	N/A

Outcomes

• Primary outcomes:

  en

  Standardize the method for genotyping all genes of the receptor of low density lipoprotein cholesterol particles. The confirmation of effectiveness of the method will be made by comparing the amplified and sequenced sequence and the standard sequence, using the BLAST algorithm (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST and Bioedit software (bioedit.software.informer.com). The quality of the sequences obtained will be evaluated through the package Phred/Phrap/Consed (http://www.phrap.org).

  pt-br

  Padronizar o método para genotipar todo o receptor das partículas de colesterol de baixa densidade. A confirmação de efetividade do método será feita através da comparação entre a sequencia amplificada e sequenciada e a sequencia padrão, utilizando o algoritmo BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST e o software Bioedit (bioedit.software.informer.com). A qualidade das sequencias obtidas será avaliada através do pacote Phred/Phrap/Consed (http://www.phrap.org).

  en

  Using the standard method, make a definitive diagnosis of the index cases by identifying mutations in the receptor gene of the low density lipoprotein cholesterol.

  pt-br

  Através do método padronizado, realizar o dignóstico definitivo dos casos índices através da identificação de mutações no gene do receptor das partículas do colesterol de baixa densidade.

• Secondary outcomes:

  en

  Track the first, second and third degree family of index cases with confirmed diagnosis of familial hypercholesterolemia, and identify in those relatives, the presence of disease-causing mutation, thus confirming the diagnosis of familial hypercholesterolemia.

  pt-br

  Rastrear os parentes de primeiro, segundo e terceiro grau dos casos índices com diagnóstico confirmado de hipercolesterolemia familiar, e identificar nesses parentes, a presença da mutação causadora da doença, confirmando assim, nos parentes que apresentarem mutação, o diagnóstico de hipercolesterolemia familiar.

  en

  Trial cardiovascular risk in individuals with and without familial hypercholesterolemia. Evaluate the difference in the levels and prevalence of dyslipidemia in individuals assessed by the concentration of total cholesterol, cholesterol of low density lipoprotein (LDL-C), cholesterol in small, dense fraction of low density lipoprotein (sd LDL), triglycerides, high density lipoprotein cholesterol (HDL-C). To assess the renal and hepatic function through the enzyme creatinine, urea analysis, and aspartate aminotransferase and alanine aminotrasnferase. Expected to observe the occurrence of diabetes and insulin resistance through the glucose analysis, insulin and calculating the homeostatic model assesment (Homai). To observe the prevalence of subclinical inflammation, through the C-reactive protein analysis of high sensitivity (hs-CRP) and uric acid. Expected to observe the prevalence of prehypertension and hypertension, through the measurement of systolic and diastolic blood pressure. Expected to observe the prevalence of overweight and obesity in students, by calculating the body mass index (BMI). The values are presented as mean and standard deviation, or absolute and percentage value. Differences between individuals with and without the disease will be analyzed by Student t-test or Mann Whitney test for parametric and non-parametric data, respectively, and p less than or equal to 0.05 is considered significant.

  pt-br

  Triar o risco cardiovascular nos indivíduos com e sem hipercolesterolemia familiar. Observar a diferença nas concentrações e prevalência de dislipidemias nos indivíduos, avaliados através da concentração de colesterol total, colesterol da lipoproteína de baixa densidade (LDL-c), colesterol da fração pequena e densa de da lipoproteína de baixa densidade (sd-LDL), triglicerídeos, colesterol da lipoproteína de alta densidade (HDL-C). Avaliar a função renal e hepática, através das enzima creatinina, análise de ureia e enzimas aspartato aminotransferase e alanina aminotrasnferase. Espera-se observar a prevalência de diabetes e resistência a insulina, através da análise de glicose, insulina e cálculo do homeostatic model assesment (HOMAi).Espera-se observar a prevalência de inflamação subclínica, através da análise de proteína C reativa de alta sensibilidade (PCR-as) e ácido úrico. Espera-se observar a prevalência de pré-hipertensão e hipertensão arterial, através da aferição da pressão arterial sistólica e diastólica. Espera-se observar a prevalência de sobrepeso e obesidade nos estudantes, através do cálculo do índice de massa corporal (IMC). Os valores serão apresentados em média e desvio padrão, ou valor absoluto e percentual. Diferenças entre indivíduos com e sem a doença serão analisadas através dotest-t de Student ou Mann Whitney, para dados paramétricos e não paramétricos, respectivamente e p menor ou igual 0,05 será considerado significativo.

Contacts

• Public contact
  • Full name: Heloisa Pamplona Cunha
  • • Address: Desembargador Vitor Lima 410
    • City: Florianópolis / Brazil
    • Zip code: 88.040-400
  • Phone: +55(48)99976966
  • Email: helopc@hotmail.com
  • Affiliation: Universidade Federal de Santa Catarina
   
• Scientific contact
  • Full name: Heloisa Pamplona Cunha
  • • Address: Desembargador Vitor Lima 410
    • City: Florianópolis / Brazil
    • Zip code: 88.040-400
  • Phone: +55(48)99976966
  • Email: helopc@hotmail.com
  • Affiliation: Universidade Federal de Santa Catarina
   
• Site contact
  • Full name: Heloisa Pamplona Cunha
  • • Address: Desembargador Vitor Lima 410
    • City: Florianópolis / Brazil
    • Zip code: 88.040-400
  • Phone: +55(48)99976966
  • Email: helopc@hotmail.com
  • Affiliation: Universidade Federal de Santa Catarina
   

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