RBR-10bk2qbb Effect of stem cells in patients with flaccid bladder

Date of registration: 05/27/2021 ^(mm/dd/yyyy)
Last approval date : 05/27/2021 ^(mm/dd/yyyy)

Study type:

Interventional

Scientific title:

Trial identification

• UTN code:

• Public title:

  en

  Effect of stem cells in patients with flaccid bladder

  pt-br

  Efeito de Células tronco em pacientes com Bexiga flacida

• Scientific acronym:

• Public acronym:
• Secondaries identifiers:
  • 78716517.4.0000.0021
    Issuing authority: Orgão Emissor: Plataforma Brazil
  • 2.745.746
    Issuing authority: Comite Nacional de Etica em Pesquisa
  • 23909398
    Issuing authority: ISRCTN - REGISTRY

Sponsors

• Primary sponsor: Universidade Federal de Mato Grosso do Sul
• Secondary sponsor:
  • Institution: Universidade Federal de Mato Grosso do Sul
• Supporting source:
  • Institution: Universidade Federal de Mato Grosso do Sul

Health conditions

• Health conditions:

  en

  Urinary Bladder Underactive

  pt-br

  Detrusor hipoativo

• General descriptors for health conditions:

  en

  N311 Urinary Bladder Underactive

  pt-br

  N311 Detrusor hipoativo

• Specific descriptors:

Interventions

• Interventions:

  en

  Twenty individuals will be involved in the study randomly divided into 2 groups through a computer program. GROUPS Group A - GA (n = 10) Patient with detrusor hypocontractility and undergoing clean intermittent self-catheterization. They will be evaluated with urodynamic study and with quality of life index questionnaires and voiding diary before admission to this study and after 120 days of outpatient clinical follow-up. They will therefore be treated according to the gold standard method and will not receive invasive procedures for the collection and application of stem cells. Group B - GB (n = 10) Patient with detrusor hypocontractility and undergoing clean intermittent self-catheterization. They will be evaluated with urodynamic study and with quality of life index questionnaires and voiding diary before the experiment and after 90 and 120 days after intravesical injection of stem cells. This group will also be subjected to the collection of peripheral fat cells to obtain mesenchymal stem cells ACQUISITION OF MESENQUIMAL STEM CELLS The primary culture cells will be collected from peripheral fatty tissue only from patients in group B. To do so, collection will be performed on an outpatient basis with local anesthesia using 2% subcutaneous lidocaine and using a 40x12 mm syringe and needle for material collection. The tissue will be placed in a washing medium with sterile PBS and immediately transferred to a sterile conical tube (TPP®). In a laminar flow, the collected material will be washed in Sterile PBS, with 1% antibiotic (Gibco®), 3 times followed by centrifugation (900g, 2 minutes). Then the material will be resuspended in 4mL of DMEM-low glucose (Gibco®). To separate the mononuclear fraction from the bone marrow, the resuspended material will be submitted to the Histopaque protocol (Sigma®). For that, 4mL of Histopaque will be added, delicately, to the collected material and then the conical tube will be centrifuged at 400g for 30 minutes. After centrifugation, there will be the formation of an interface between Histopaque and DMEM that will contain mononuclear cells. These will be collected and washed in PBS five times (900g, 5 minutes). The formed pellet will then be resuspended in DMEM-low glucose, supplemented with 10% fetal bovine serum (Gibco®). The cells will be transferred to 25 cm2 culture flasks (TPP®) at a concentration of 2x105 cells (OLIVEIRA et al., 2011). The cells will be kept in culture at 5% CO2 at 37ºC having their medium changed after adhesion (maximum time of 72 hours) and thereafter every 48 hours. When cell growth reaches about 80% of confluence, trypsinization will be carried out, evaluation of cell viability, using trypan blue (1: 1 of solution containing the stem cells and trypan blue - Gibco®), counting and later repeating to other cultivation flasks for clonal expansion. CLONAL EXPANSION Each time the flasks reach a minimum confluence of 80%, the culture medium of the culture flasks will be discarded and these will be washed with 3mL of PBS in triplicate. Then, the cells adhered to the bottom of the bottle will be trypsinized with 0.25% trypsin solution and incubated at 37ºC in 5% CO2 or subsequent centrifugation at 22ºC, 900g and 10 minutes. The supernatant will be completely discarded and the pellet resuspended in 1mL of PBS (MONTEIRO, 2009). As recommended by Meirelles; Chagastelles; Nardi (2006), an aliquot of 10µL of solution will be added to 10µL of Tripan Blue and slightly homogenized with the aid of a micropipette. This solution will be used to assess cell viability in a Neubauer chamber. The rest of the cell suspension will be transferred to a new culture flask until the number of cells required for cell therapy is obtained. PREPARATION OF MATERIAL FOR TRANSPLANTATION The cells will be kept in a process of clonal expansion until they reach about 4.0x106 cells. Soon after, the cells will be trypsinized and washed in PBS with subsequent centrifugation at 22ºC, 900g and 10 minutes, three times. The pellet will be resuspended in 1mL of PBS. The cells will be evaluated for cell viability and soon afterwards they will be diluted in PBS in the concentration of 1.0x107 cells (Monteiro, 2009) which will be transferred to the experimental patients belonging to the groups that will be submitted to the cell therapy. MESENQUIMAL STEM CELL TRANSPLANTATION Patients will be admitted to the university hospital after preoperative clinical evaluation. On the day of the procedure, they will fast for 8 hours to receive venous sedation. They will receive an injection, intramuscularly into the detrusor muscle, containing a solution of stem cells, this procedure is urethrocystoscopy. The bladder should be instilled with saline solution until adequate visualization occurs allowing the injections to be performed. For patients who have intolerance to the procedure (example: spasticity, autonomic dysreflexia, among others), a wash with local anesthetic (for example, lidocaine) or sedation, administration (local anesthetic or sedation) should be administered as per the specialist's routine. Immediately after the injections are applied, the saline solution, used to visualize the bladder walls, must be drained. Patients will be discharged from the hospital on the same day of the procedure if they are fully fit in their physical and clinical conditions or may be hospitalized until they are fully recovered. For this, they will be evaluated by the medical and nursing staff and if you need assistance or hospitalization before or after the procedures, they will remain in the Urology Ward of the University Hospital under the responsibility of the researcher. They will remain under outpatient follow-up to assess complications and will undergo a new urodynamic evaluation after 90 and 120 days to assess possible variations in maximum flow, average flow, detrusor contraction pressure as well as post-voiding urinary volume. EVALUATION INSTRUMENTS Socio-demographic characteristics, clinical history and physical examination (weight, height and BMI) will be assessed using the evaluation form 1 prepared by the responsible researcher . After that, the following questionnaires will be applied: International Consultation on Incontinence Questionnaire - Short Form (ICIQ-SF ). The International Consultation on Incontinence Questionnaire - Short Form (ICIQ-SF), is a self-administered questionnaire that aims to assess the severity and impact of urinary incontinence on quality of life and qualifies the patient's urine loss. The questionnaire has four questions that assess the following items: frequency, severity, impact and items intended for the knowledge of causes and situations experienced by the patient in relation to UI. The total score is generated by adding the values ​​obtained from questions 3, 4 and 5, knowing that the higher the score, the greater the impact on the interviewee's quality of life. Through the total score, a classification is given for the quality of life, 0 being considered no impact, mild impact (from 1 to 3 points), moderate impact (from 4 to 6 points), severe impact (from 7 to 9 points) and very serious impact when the score is greater than or equal to 10 points.

  pt-br

  Serão envolvidas no estudo 20 indivíduos divididos aleatoriamente em 2 grupos através de um programa de computador. GRUPOS Grupo A – GA (n=10) Paciente com Hipocontratilidade detrusora e em regime de auto cateterismo intermitente limpo. Serão avaliadas com estudo urodinâmico e com questionários de índice de qualidade de vida e diário miccional antes da admissão a este estudo e após 120 dias de acompanhamento clinico ambulatorial. Serão portanto tratados de conforme o método padrão ouro e não receberão procedimentos invasivos de coleta e aplicação de células tronco. Grupo B – GB (n=10) Paciente com hipocontratilidade detrusora e em regime de auto cateterismo intermitente limpo. Serão avaliadas com estudo urodinâmico e com questionários de índice de qualidade de vida e diário miccional antes do experimento e após 90 e 120 dias da injeção intravesical de células tronco. Esse grupo também será submetido a coleta de células gordurosas periféricas para obtenção de células tronco mesenquimais AQUISIÇÃO DAS CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS As células da cultura primária serão coletadas do tecido gorduroso periférico somente dos pacientes do grupo B. Para tanto será realizado coleta em nível ambulatorial com anestesia local utilizando lidocaína a 2% subcutânea e utilizando seringa e agulha 40x12 mm para coleta do material. O tecido será colocado meio de lavagem com PBS estéril e imediatamente transferido para um tubo cônico (TPP®) estéril. Em fluxo laminar, o material coletado será lavado em PBS estéril, com 1% de antibiótico (Gibco®), 3 vezes seguido de centrifugação (900g, 2 minutos). Em seguida o material será ressuspendido em 4mL de DMEM-low glucose (Gibco®). Para separação da fração mononuclear da medula óssea, o material ressuspendido será submetido ao protocolo do Histopaque (Sigma®). Para tanto, 4mL de Histopaque serão adicionados, delicadamente, ao material coletado e em seguida o tubo cônico será centrifugado a 400g por 30 minutos. Após a centrifugação haverá a formação de uma interface entre o Histopaque e o DMEM que conterá as células mononucleares. Estas serão coletadas e lavadas em PBS por cinco vezes (900g, 5 minutos). O pellet formado será então ressuspendido em DMEM-low glucose, suplementado com soro fetal bovino (Gibco®) a 10%. As células serão transferidas para frascos de cultivo de 25cm2 (TPP®) na concentração de 2x105 células (OLIVEIRA et al., 2011). As células serão mantidas em cultura a 5% de CO2 a 37ºC tendo o seu meio trocado após a adesão (tempo máximo de 72 horas) e posteriormente a cada 48h. Quando o crescimento celular atingir cerca de 80% de confluência será realizado a tripsinização, avaliação da viabilidade celular, por azul de tripan (1:1 de solução contendo as células-tronco e azul de tripan - Gibco®), contagem e posterior repique para outros frascos de cultivo para expansão clonal. EXPANSÃO CLONAL Cada vez que os frascos atingirem confluência mínima de 80% o meio de cultura das garrafas de cultivo será descartado e essas serão lavadas com 3mL de PBS em triplicata. Em seguida, as células aderidas ao fundo da garrafa serão tripsinizadas com solução de tripsina 0,25% e incubadas a 37ºC em 5% de CO2 e umidade de 95% durante no máximo 5 minutos. Posteriormente, as células serão ressuspendidas em 5,0mL de meio suplementado com soro fetal bovino (10%) e a suspensão contendo as células-tronco será transferida para tubo de centrífuga para posterior centrifugação a 22ºC, 900g e 10 minutos. O sobrenadante será totalmente descartado e o pellet ressuspendido em 1mL de PBS (MONTEIRO, 2009). Conforme preconizado por Meirelles; Chagastelles; Nardi (2006), uma alíquota de 10µL de solução será acrescida a 10µL de Azul de Tripan e levemente homogeneizada com auxílio de uma micropipeta. Essa solução será utilizada para avaliação da viabilidade celular em câmara de Neubauer O restante da suspensão celular será transferido para um novo frasco de cultivo até a obtenção do número de células necessárias para a terapia celular. PREPARAÇÃO DO MATERIAL PARA TRANSPLANTE As células serão mantidas em processo de expansão clonal até atingirem cerca de 4,0x106 células. Logo em seguida as células serão tripsinizadas e lavadas em PBS com posterior centrifugação a 22ºC, 900g e 10 minutos, por três vezes. O pellet será ressuspendido em 1mL de PBS. As células serão avaliadas quanto à viabilidade celular e logo em seguida serão diluídas em PBS na concentração de 1,0x107 células (Monteiro, 2009) as quais serão transferidas aos pacientes experimentais pertencentes aos grupos que serão submetidos à terapia celular. TRANSPLANTE DAS CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS Os pacientes serão internados no hospital universitário após avaliação clínica pré-operatória. No dia do procedimento permanecerão em jejum de 8 horas para receber sedação venosa. Os mesmos receberão uma injeção, por via intramuscular no músculo detrusor, contendo uma solução de células-tronco, este procedimento é a uretrocistoscopia. A bexiga deve ser instilada com solução salina até que ocorra a visualização adequada permitindo realizar as injeções, para os pacientes que apresentam intolerância ao procedimento (exemplo: espasticidade, disreflexia autonômica, entre outros) pode ser utilizada uma lavagem com anestésico local (por exemplo a lidocaína) ou sedação, a administração (anestésico local ou sedação) devem ser administrados conforme rotina do especialista. Imediatamente após as aplicações das injeções, a solução salina, utilizada para a visualização das paredes da bexiga, deve ser drenada. Os pacientes receberão alta hospitalar no mesmo dia do procedimento caso estejam plenamente aptos em suas condições físcias e clínicas ou poderão ficar internadoes até que esteja plenamente recuperados. Para isso serão avaliados pela equipe médica e de enfermagem e caso necessita de atendimento ou internação antes ou após os procedimentos permanecerão na Enfermaria da Urologia do Hospital Universitário sob responsabilidade do pesquisador. Permanecerão em acompanhamento ambulatorial para avaliação de intercorrências e serão submetidos após 90 e 120 dias nova avalição urodinâmica para avaliar possíveis variações no fluxo máximo, fluxo médio, pressão de contração detrusora bem como de volume urinário pós-miccional. Serão avaliados também através de questionário os sintomas urinários e o índice de qualidade de vida relacionado à incontinência urinária. INSTRUMENTOS DE AVALIAÇÃO As características sócio-demográficas, a história clínica e exame físico (peso, altura e IMC) será avaliado através da ficha de avaliação 1 elaborado pelo pesquisador responsável (APÊNDICE C). Após isto, serão aplicados os seguintes questionários: International Consultation on Incontinence Questionnaire - Short Form (ICIQ-SF -). O questionário International Consultation on Incontinence Questionnaire - Short Form (ICIQ-SF), é um questionário auto-administrável que tem por objetivo avaliar a gravidade e impacto da incontinência urinária na qualidade de vida e qualifica a perda de urina do paciente. O questionário possui quatro questões que avaliam os seguintes itens: frequência, severidade, impacto e itens destinados ao conhecimento de causas e situações vivenciadas pelo paciente em relação à IU. O escore total é gerado através da soma dos valores obtidos das questões 3, 4 e 5, sabendo-se que, quanto maior o escore maior, maior é o impacto sobre a qualidade de vida da entrevistada. Através do escore total, é dada uma classificação para a qualidade de vida, sendo 0 considerado nenhum impacto, impacto leve (de 1 a 3 pontos), impacto moderado (de 4 a 6 pontos), impacto grave (de 7 a 9 pontos) e impacto muito grave quando a pontuação é maior ou igual a 10 pontos.

• Descriptors:

  en

  C12.777.829.893 Urinary Bladder Underactive

  pt-br

  C12.777.829.893 Detrusor hipoativo

Recruitment

• Study status: Recruitment completed
• Countries
  • Brazil
• Date first enrollment: 10/01/2019 ^(mm/dd/yyyy)

• Target sample size:	Gender:	Minimum age:	Maximum age:
  20	-	0	0

• Inclusion criteria:

  en

  The inclusion criteria will be male and female patients with a urodynamic study showing only detrusor hypocontractility, without the presence of an obstructive factor to the urinary flow. They must be in clean intermittent catheterization, not undergoing any surgical procedure in the lower urinary tract in the last 12 months.

  pt-br

  Os critérios de inclusão serão pacientes do sexo masculino e feminino com estudo urodinâmico demostrando apenas hipocontratilidade detrusora, sem a presença de fator obstrutivo ao fluxo urinário. Deverão estar em regime de cateterismo intermitente limpo, não serem submetidos a qualquer procedimento cirúrgico no trato urinário inferior nos últimos 12 meses.

• Exclusion criteria:

  en

  Exclusion criteria: end-stage renal failure (with oligo-anuria), recurrent urinary tract infection, non-adherence to clinical monitoring protocols and clean intermittent auto-catheterization. Presence of any malignant neoplasm confirmed in treatment or recently treated or even any suspicion of cancer will be an important exclusion criterion due to contraindication to the use of stem cells in these patients.

  pt-br

  Critérios de exclusão: insuficiência renal terminal (com oligo-anúria), infecção urinária de repetição, não aderência aos protocolos de acompanhamento clinico e auto cateterismo intermitente limpo. Presença de qualquer neoplasia maligna confirmada em tratamento ou já tratada recentemente ou mesmo qualquer suspeita de câncer consistirá em importante critério de exclusão devido a contra inidicação de uso de células tronco nesses pacientes.

Study type

• Study design:

• Expanded access program	Purpose	Intervention assignment	Number of arms	Masking type	Allocation	Study phase
  1	Treatment	Parallel	2	Open	Non-randomized-controlled	N/A

Outcomes

• Primary outcomes:

  en

  Expected outcome: improvement of bladder contractility Evaluation method: Urodynamic study. The urodynamic study was also carried out, which provided several data for comparative evaluation between the moment before and after the transplantation of stem cells. Maximum flow, medium flow, urine volume and post-voiding residue were obtained in the initial urofluxometry. In the stage of Differential Cystometry, information was obtained such as maximum cystometric capacity, complacency and the presence or absence of urinary losses or detrusor hyperactivity. In the flow-pressure study the data were maximum flow, detrusor pressure at maximum flow and detrusor contractility index calculated (Bladder contractility index: BCI = pdetqmax + 5 x Qmax).

  pt-br

  Desfecho esperado: melhora da contratilidade da bexiga Metodo de avaliação: Estudo urodinamico. Foram realizados também o Estudo urodinamico que forneceram vários dados para avaliação comparativa entre o momento antes e depois do transplante de células tronco. Foram obtidos fluxo máximo, fluxo médio, volume urinado e resíduo pos-miccional na urofluxometria inicial. Na fase da Cistometria diferencial obteve-se informações como capacidade cistométrica máxima, complascencia e quanto a presença ou não de perdas urinarias ou hiperatividade detrusora. No Estudo fluxo-pressão os dados foram fluxo máximo, pressão detrusora no fluxo máximo e calculado índice de contratilidade detrusora ( Bladder contratility índex: BCI = pdetqmax + 5 x Qmax).

• Secondary outcomes:

  en

  Secondary outcome: Improved quality of life in relation to urinary incontinence symptoms The patients were submitted to the quality of life questionnaire in Urinary Incontinence (ICIQ-SF: International continence on incontinence questionaire - Short Form) before and after the intervention

  pt-br

  Desfecho secundário: Melhora da qualidade de vida em relação a sintomas de incontinecia urinária Os pacientes foram submetidos ao questionário de qualidade de vida em Incontinencia Urinária ( ICIQ-SF: International continence on incontinenca questionaire – Short Form ) antes e depois da intervenção

Contacts

• Public contact
  • Full name: Henrique Rodrigues Scherer Coelho
  • • Address: Rua Catulino Severo Monteiro 389
    • City: Campo Grande / Brazil
    • Zip code: 79113-040
  • Phone: +55067992929345
  • Email: henriquercoelho@yahoo.com.br
  • Affiliation:
   
• Scientific contact
  • Full name: Henrique Rodrigues Scherer Coelho
  • • Address: Rua Catulino Severo Monteiro 389
    • City: Campo Grande / Brazil
    • Zip code: 79113-040
  • Phone: +55067992929345
  • Email: henriquercoelho@yahoo.com.br
  • Affiliation:
   
• Site contact
  • Full name: Henrique Rodrigues Scherer Coelho
  • • Address: Rua Catulino Severo Monteiro 389
    • City: Campo Grande / Brazil
    • Zip code: 79113-040
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  • Affiliation:
   

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